混合孢子悬浮液的制备

   混合孢子悬浮液制备的要求与过程如下:

   ①使用无菌技术制各至少包含规定的试验菌种的孢子悬浮液。

   ②将纯菌种分别培养在合适的培养基上(如马铃薯葡萄琼脂),而球毛壳霉应在无机盐琼脂表面的滤纸上进行培养。无机盐琼脂的配制方法如下:将琼脂溶解在规定的1L无机盐溶液中ρ

   ③试验前检查菌种的纯度。L7815ABD2T-TR

   ④制备保藏纯菌种的次级培养菌种,并在30℃±1°C培养10~21天。

   ⑤向每种次级培养菌种的试管中注入每升含005g无毒润湿剂的水溶液10mL。

   ⑥用无菌玻璃圆棒、铂丝或镍铬丝在试验菌种的表面轻刮。

   ⑦将孢子提取液注入125mL带盖锥形瓶,瓶内装45mL水、50~70粒直径为5mm的实心玻璃球。

   ⑧剧烈振荡锥形瓶,以打碎孢子,从菌丝体中释放出来。

   ⑨用装有6mm厚玻璃棉的玻璃漏斗,将霉菌孢子悬浮液过滤到锥形瓶中,以去除打碎的菌丝体碎片和琼脂块。

   ⑩将过滤后的孢子悬浮液离心,弃掉上层液。

   在剩余物中加入50mL水重新悬浮并离心。将获得的每种霉菌孢子至少以这种方法离心3次(直到上层液变清)。

   用无机盐溶液稀释己离心的最后剩余物,通过计数器计算,最终使得每升孢子悬浮液含有1000OO0×(⒒20%)个孢子。

   对试验用的每一种菌种孢子进行活力检验。将相等容积的每种孢子悬浮液混合,得到最后的混合孢子悬浮液。